上海美端管线探测器探测时指针归零维修速度快
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    商品详情

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      1. 再试一次反应,你可能遗漏了一些东西。
      2. 检查聚合酶缓冲液是否已完全解冻并充分混合。
      3. 检查引物是否稀释到正确的浓度。
      4. 配制新的 dNTP 溶液。dNTPs 可以被反复冻融破坏。
      5. 重新制作模板 DNA,尤其是在处理基因组 DNA 时。旧库存可能会退化或被剪掉。
      6. 使用不同的聚合酶。如果使用校对聚合酶进行扩增有问题,我经常尝试使用良好的旧 Taq,这通常可以解决问题。不过请记住对插入片段进行排序——如果幸运的话,不会有任何重大突变,您可以按原样使用插入片段。否则,使用 Taq 和 1/10 浓度的校对酶的混合物重新进行 仪器,您仍应获得相同的扩增,但错误率较低。
      7. 改变退火温度。如果退火温度太高,您显然不会按照您想要的顺序进行任何启动。另一方面,太低的退火温度会导致这种非特异性引发,不允许出现特定条带。找到温度的方法是使用梯度循环仪并以 1oC 的增量测试从引物 Tm 到低于 10oC 的范围。
      8. 尝试不同模板浓度的反应。您的模板浓度可能太低或制备中的杂质浓度可能太高。在 50 微升反应中尝试 5-10 次平行反应,浓度为 10 到 200 ng。
      9. 检查 仪器 仪——温度和时间是否符合您的预期?
      10. 在另一台循环仪中尝试反应——您使用的循环仪的校准可能已关闭。
      11.尝试添加剂。我发现 DMSO 在有问题的扩增中特别有用。
      12.重新设计引物——尽量遵守指南。

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